Fondata alla fine del X secolo, è una delle chiese più antiche della città e sorge nel luogo dove la tradizione vuole che sant’Ambrogio sia stato ospitato. Nel 988 vi si insediarono le monache benedettine. Ricostruita nel Duecento e ristrutturata nel XV secolo subì nuovi interventi nel Settecento ad opera di G.B. Foggini. Nel XX secolo sono state riaperte le antiche monofore gotiche ed è stata riportata in vista la copertura a capriate. All’esterno, all’angolo di via de’ Macci, è il Tabernacolo con la figura del santo benedicente di Giovanni della Robbia (1525 ca.)