Sono le più estese catacombe di Roma e si sviluppano su tre livelli per un totale di circa 15 km. Si costituirono nel III secolo nella proprietà di Flavia Domitilla, nipote di Vespasiano, da cui prendono il nome. Tra i capolavori si segnalano il cubicolo dei Fornai e la pittura muraria con la Madonna col Bambino e quattro Magi. Nel sottosuolo si accede anche alla Basilica dei Santi Nereo e Achilleo, edificata sulla tomba dei martiri di III secolo, abbandonata dopo il terremoto dell’897 che la distrusse e riscoperta nel 1874.
A poche centinaia di metri, su via Ardeatina, sorgono le tristemente celebri Fosse Ardeatine.