È uno dei capolavori assoluti del manierismo e fu realizzata su committenza di Elena Orsini, per la sua cappella, la seconda della navata destra, che fu decorata da altri affreschi che celebravano le Storie della Vera Croce. Di quest’ultime oggi non rimane più nulla se non i disegni preparatori e la Deposizione resta visibile nella cappella successiva. L’opera riprende lo schema dell’analogo dipinto di Rosso Fiorentino ed è caratterizzata da virtuosistiche pose acrobatiche dei personaggi. Divenne una delle opere maggiormente studiate e copiate nei secoli seguenti.